食品中非法添加藥物西布曲明

 

 

 

1、范圍

 

    本文件規(guī)定了食品中西布曲明的激光拉曼光譜快速檢測(cè)方法。

 

    本文件適用于聲稱具有減肥、瘦身等功能的食品中西布曲明成分的快速檢測(cè)。

 

 

2、規(guī)范性引用文件

 

    下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

 

    GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

 

 

3、術(shù)語(yǔ)和定義

 

    本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

 

 

4、原理

 

不同物質(zhì)具有與其分子結(jié)構(gòu)相對(duì)應(yīng)的特征拉曼光譜。一般樣品經(jīng)稀釋，復(fù)雜樣品經(jīng)液液萃取，加表面增強(qiáng)試劑對(duì)信號(hào)增強(qiáng)，進(jìn)行拉曼光譜掃描。與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)中的西布曲明特征拉曼位移（818cm-1±3 cm-1,1090 cm-1±3 cm-1）進(jìn)行匹配識(shí)別，對(duì)樣品中的西布曲明進(jìn)行定性判定。

 

 

5、試劑和材料

 

5.1  試劑除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

 

5.1.1  乙酸乙酯，色譜純。

 

5.1.2  甲醇，色譜純。

 

5.1.3  堿化試劑：準(zhǔn)確稱取8g氫氧化鈉，用水定容至100mL。

 

5.1.4  促凝劑：1 mol/L的鹽酸。

 

5.1.5  表面增強(qiáng)試劑：納米金溶膠或相當(dāng)者。避光，4 °C~20 °C保存，有效期6個(gè)月。

    注：表面增強(qiáng)試劑的參考配制方法：納米金溶膠：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加熱至沸，劇烈攪拌下準(zhǔn)確加入1.0 mL 1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，金黃色的氯金酸水溶液在2 min內(nèi)變?yōu)榧t色，繼續(xù)煮沸15 min，冷卻后用蒸餾水補(bǔ)加到100 mL。

 

5.1.6  西布曲明標(biāo)準(zhǔn)品：C17H26ClN，CAS號(hào)：106650-56-0，純度≥98%。

 

5.1.7  西布曲明標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.1000 g，甲醇（HPLC）準(zhǔn)確定容至100 mL。保證配制樣本濃度為1 mg/mL，于4 °C避光保存，有效期1個(gè)月。

 

5.2  材料

 

5.2.1 塑料具塞離心管：2 mL和10 mL。

 

5.2.2移液吸頭：200 μL，1000 μL和5000 μL。

 

 

6、儀器和設(shè)備

 

6.1  便攜式拉曼光譜儀穩(wěn)頻激光光源：發(fā)射波長(zhǎng)為785±1 nm，線寬<0.1 nm，能量≥250 mW；光譜分辨率≤10 cm-1；光譜響應(yīng)范圍300cm-1~2700 cm-1，或大于該響應(yīng)范圍。

 

6.2  移液器：10-100 μL、100-1000 μL和1000-5000 μL。

 

6.3  渦旋振蕩器。

 

6.4  離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥10000r/min。

 

6.  5電子天平：感量為0.01 g和0.0001 g。

 

7、測(cè)定步驟

 

7.1  提取

 

7.1.1 膠囊類樣品

 

    取待測(cè)樣品內(nèi)部粉末0.5 g，倒入10 mL離心管中，從步驟2開始進(jìn)行處理；向離心管中加入3000 μL乙酸乙酯，渦旋振蕩1分鐘，靜置1分鐘，取1500 μL上清液于2 mL離心管中，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒；取1000μL離心后清液于色素凈化管中，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒；取離心后液體600 μL于2 mL離心管，向其中加入400 μL堿化試劑，振蕩10秒后，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心10秒，取上層清液待測(cè)；

 

7.1.2 藥丸類樣品

 

    將待測(cè)樣品用潔凈容器破碎后取0.5 g，倒入10 mL離心管中，從步驟2開始進(jìn)行處理；向離心管中加入3000 μL乙酸乙酯（渦旋振蕩1分鐘，靜置1分鐘，取1500 μL上清液于2 mL離心管中，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒；取1000 μL離心后清液于色素凈化管中，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒；取離心后液體600 μL于2 mL離心管，向其中加入400 μL堿化試劑，振蕩10秒后，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心10秒，取上層清液待測(cè)；

 

7.1.3 液體類樣品

 

    用移液器（或潔凈滴管）吸取1000 μL待測(cè)樣品，加入到10 mL離心管中，從步驟2開始進(jìn)行處理；向離心管中加入2000 μL乙酸乙酯，渦旋振蕩1分鐘，靜置1分鐘，取1500 μL上清液于2 mL離心管中，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒；取1000 μL離心后清液于色素凈化管中，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒；取離心后液體600 μL于2 mL離心管，向其中加入400 μL堿化試劑，振蕩10秒后，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心10秒，取上層清液待測(cè)。

 

7.2 測(cè)定

 

7.2.1 拉曼光譜儀器分析參考條件

 

    激光能量≥250 mW，數(shù)據(jù)采集時(shí)間≥4 s。

 

7.2.2 表面增強(qiáng)和測(cè)定

 

    向檢測(cè)瓶中依次加入300 μL表面增強(qiáng)試劑（5.1.6），50 μL待測(cè)液，100μL促凝劑（5.1.5），混勻后立即置于檢測(cè)池中檢測(cè)。7.3 質(zhì)控試驗(yàn)每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。7.3.1 陰性對(duì)照稱取空白試樣，按照7.1和7.2步驟與樣品同法操作。7.3.2 陽(yáng)性對(duì)照準(zhǔn)確稱取空白試樣10 g置于15 mL具塞離心管中，加入100 μL西布曲明標(biāo)準(zhǔn)溶液（5.1.8），使待測(cè)樣本濃度為10 mg/kg，按照7.1和7.2步驟與樣品同法操作。

 

 

8、結(jié)果計(jì)算和表述

 

8.1 定性

 

    儀器軟件將測(cè)試結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)中的西布曲明進(jìn)行匹配識(shí)別，根據(jù)譜圖818cm-1±3 cm-1,1090 cm-1±3 cm-1處特征拉曼光譜，對(duì)樣品中的西布曲明進(jìn)行結(jié)果判定，當(dāng)樣品的拉曼峰包含該目標(biāo)物的2個(gè)特征峰判定為陽(yáng)性。陰性代表該樣品不含有西布曲明或者低于檢出限，陽(yáng)性則代表該樣品含有西布曲明且大于等于檢出限。西布曲明表面增強(qiáng)拉曼光譜圖見附錄A.1。

 

8.2 確證

 

    本方法為初篩方法，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)用其他技術(shù)手段進(jìn)行確證。

 

 

9 方法性能指標(biāo)

 

9.1 檢出限

 

    本方法檢出限為10 mg/kg。

 

9.2 靈敏度

 

    靈敏度應(yīng)≥95%。

 

9.3  特異性

 

    特異性應(yīng)≥95%。

 

9.4  假陰性率

 

    假陰性率應(yīng)≤5%。

 

9.5  假陽(yáng)性率

 

    假陽(yáng)性率應(yīng)≤5%。

 

    性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄B中表B.1