食藥物質中赭曲霉毒素B的測定高效液相色譜法

 

 

 

一、 適用范圍

 

本文件描述了按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材的物質（簡稱食藥物質）中赭曲霉毒素B的高效液相色譜-熒光檢測方法。
本文件適用于石斛、梔子、蓮子、百合、薏苡仁、茯苓和麥芽中赭曲霉毒素B含量的測定，附錄A內(nèi)其余食藥物質可參考執(zhí)行。

 

二、 規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。

 

 

三、 原理

 

采用乙腈提取液提取試樣中的赭曲霉毒素B，分散固相萃取方法凈化，高效液相色譜-熒光檢測法檢測，外標法定量。

 

四、 試劑和材料

 

除另有規(guī)定外，所用試劑應均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

 

4.1試劑

 

4.1.1  乙腈（CH3CN）：色譜純。

4.1.2  甲醇（CH3OH）：色譜純。

4.1.3  甲酸（HCOOH）：色譜純。

4.1.4  無水硫酸鎂（MgSO4）。

4.1.5  氯化鈉（NaCl）。

4.1.6  檸檬酸鈉二水合物（C6H5Na3O7·2H2O）。

4.1.7  檸檬酸氫二鈉鹽倍半水合物（C6H9NaO8）。

4.1.8  石墨化碳黑（C，GCB），60~80μm。

4.1.9  N-丙基乙二胺（C5H14N2，PSA），40~60μm。

 

4.2鹽析劑和吸附劑配比

 

4.2.1  鹽析劑：無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉二水合物和檸檬酸氫二鈉倍半水合物，質量比為4∶1∶1∶0.5。

4.2.2  吸附劑1：無水硫酸鎂、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，質量比為3∶1∶1。

4.2.3  吸附劑2：無水硫酸鎂、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，質量比為3∶1∶2。

 

4.3溶液配制

 

4.3.1  0.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸，用水稀釋至1000mL，混勻。

4.3.2  2%甲酸乙腈溶液：取20mL甲酸，用乙腈稀釋至1000mL，混勻。

4.3.3  乙腈-甲酸-水溶液(50：0.05：49.95，V/V/V)：量取500mL乙腈，加入0.5mL甲酸（4.1.3），用水稀釋至1000mL，混勻。

 

4.4標準品

 

赭曲霉毒素B標準品（C20H19NO6，CAS：4825-86-9）：純度≥98%，或經(jīng)國家認證并授予標準物質證書的標準物質。

 

4.5標準溶液配制

 

4.5.1  標準儲備液（1.0mg/mL）：準確稱取一定量的赭曲霉毒素B標準品，用甲醇溶解成1mg/mL的標準儲備液，-20°C下避光保存。

4.5.2  標準工作液（4.0μg/mL）：準確移取一定量赭曲霉毒素B標準儲備液（4.5.1），用甲醇稀釋成4μg/mL的標準工作液，4°C下避光保存。

4.5.3  基質標準工作液：準確移取一定量標準工作液（4.5.2），用基質空白溶液稀釋成濃度為1、2、5、10、20、50ng/mL的基質標準工作液。

 

五、儀器和設備

 

5.1   高效液相色譜儀：配熒光檢測器。

5.2   分析天平：感量分別為0.01g和0.00001g。

5.3   超聲波發(fā)生器。

5.4   高速離心機：轉速≥5000r/min。

5.5   恒溫氮吹裝置。

5.6   渦旋混合器。

5.7   粉碎機。

5.8   1mL一次性注射器。

5.9   濾膜：0.22μm，有機系。

5.10  離心管：50mL。

5.11  20目篩。

 

六、試樣制備與保存

 

從樣品中取出具有代表性的樣品1kg，粉碎機粉碎混勻后過20目篩，裝入潔凈的自封袋中，密封，并標明標記，-20°C保存。

 

 

七、分析步驟

 

7.1提取與凈化

 

T/CIQA50-20233稱取20g試樣（精確到0.01g），加入100mL2%甲酸乙腈（4.3.2），渦旋或振蕩30s，超聲波處理10min，8000r/min離心10min，將20mL上清液轉移至另一離心管中，加入7.8g鹽析劑（4.2.1），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min，分別按不同類型食藥物質作如下處理。

 

7.1.1  石斛、梔子、蓮子、百合、茯苓、麥芽的凈化將10mL上清液轉移至另一離心管中，再加入500mg吸附劑1（4.2.2），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min

 

7.1.2  薏苡仁的凈化將10mL上清液轉移至另一離心管中，再加入600mg吸附劑2（4.2.3），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min。分別取7.1.1和7.1.2中上清液5mL，在45°C條件下，用氮氣吹干，加入1.0mL乙腈-甲酸-水溶液（4.3.3），渦旋或振蕩1min溶解殘留物，過0.22μm有機濾膜，收集濾液于進樣瓶中，用高效液相色譜-熒光檢測法測定。

 

7.2測定

 

7.2.1  液相色譜參考條件液相色譜參考條件列出如下：a)色譜柱：C18柱，（柱長150mm，柱內(nèi)徑4.6mm，填料粒徑3.5μm）或等效柱；b)檢測波長：激發(fā)波長320nm，發(fā)射波長456nm；c)流動相及洗脫條件：A：0.1%甲酸水，B：乙腈；等度洗脫：50%A-50%B；d)流速：1.0mL/min；e)柱溫：40°C；f)進樣量：10μL。

 

7.2.2  標準曲線的制作以標準工作溶液濃度為橫坐標，待測物質的峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。每次試驗均應重新繪制標準工作曲線。

 

7.2.3  定性測定按照保留時間進行定性，在相同試驗條件下，樣品中待測物質的保留時間與標準溶液中對應的保留時間偏差在±2.5%之內(nèi)。

 

7.2.4  定量測定按照7.2.1液相色譜條件測定樣液和標準工作液，外標標準曲線法測定樣品中的待測物質的含量，樣品中待測物質的響應值應在標準曲線范圍之內(nèi)，如果超出標準曲線范圍，應適當稀釋后再進樣。色譜圖參見附錄B。全國團體標準信息平臺
T/CIQA50-20234

 

7.2.5  空白試驗除不加試樣外，均按7.1和7.2步驟進行。

 

 

 

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