食品中禁用水溶性合成色素的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

 

 

 

1、范圍

 

    本文件規(guī)定了食品中32種禁用水溶性合成色素（見附錄A）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

 

    本文件適用于飲料、葡萄酒、糖果、調(diào)味醬、豆制品、熟肉等食品中32種禁用水溶性合成色素的測定。

 

 

 

2、規(guī)范性引用文件

 

    下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

 

    GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

 

    GB/T33087儀器分析用高純水規(guī)格及試驗(yàn)方法

 

 

3、術(shù)語和定義

 

    本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

 

 

4、原理

 

    試樣經(jīng)甲醇溶解定容或5%氨水-甲醇溶液提取，提取液經(jīng)氮吹置換溶劑后，經(jīng)C18萃取小管凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。

 

 

5、試劑和材料

 

    除另有說明，本實(shí)驗(yàn)使用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級水或GB/T33087中規(guī)定的高純水。

 

5.1  試劑

 

5.1.1  甲醇（CH3OH）：色譜純。

 

5.1.2  乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

 

5.1.3  氨水（NH3·H2O）：含量20%～25%

 

5.1.4  5%氨水甲醇溶液：移取5mL氨水于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

 

5.1.5  10%甲醇水溶液：移取10mL甲醇于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。

 

5.2  標(biāo)準(zhǔn)品

 

    32種禁用水溶性合成色素標(biāo)準(zhǔn)品：參見附錄B，純度≥95%。

 

5.3  標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

 

5.3.1  標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）：分別準(zhǔn)確稱取經(jīng)折算相當(dāng)于50mg（精確到0.1mg）的色素標(biāo)準(zhǔn)品，置50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6個(gè)月。

 

5.3.2  混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液A組（10mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1mL的A組色素單標(biāo)儲備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下保存，保存期3個(gè)月。

 

5.3.3  混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液B組（100mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1mL的B組色素單標(biāo)儲備溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6個(gè)月。

 

5.3.4  混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A組（1mg/L）：準(zhǔn)確移取1mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液A組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現(xiàn)配。

 

5.3.5  混合標(biāo)準(zhǔn)中間液B組（10mg/L）：準(zhǔn)確移取1mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液B組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現(xiàn)配。

 

5.3.6  混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要，用10%甲醇水溶液將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液稀釋成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

 

5.4  材料

 

5.4.1  十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40μm～60μm。

 

5.4.2  親水聚四氟乙烯微孔濾膜：0.22μm。

 

6、儀器和設(shè)備

 

6.1  液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧電離源（ESI）。

 

6.2  分析天平：感量為0.1mg、0.01g。

 

6.3  離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。

 

6.4  超聲波清洗器。

 

6.5  氮吹儀。

 

7  分析步驟

 

7.1  試樣制備飲料、葡萄酒、調(diào)味醬試樣應(yīng)混合均勻，含氣飲料及葡萄酒試樣應(yīng)先加熱或超聲去除二氧化碳后混合均勻，糖果、豆制品、熟肉試樣經(jīng)食品粉碎機(jī)攪碎混勻，制備好的試樣密封冷藏避光保存，備用。

 

7.2  試樣提取

 

7.2.1  飲料、葡萄酒試樣

 

 

 

    稱取試樣1g（準(zhǔn)確至0.01g）于10mL比色管，用甲醇定容至刻度。準(zhǔn)確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過0.22μmPTFE濾膜，待測。

 

7.2.2  糖果試樣

 

 

 

    糖果：稱取試樣2g（準(zhǔn)確至0.01g）于小燒杯中，加入5mL甲醇，微熱溶解后，溶液轉(zhuǎn)移至10mL比色管，用甲醇多次洗滌燒杯，洗液合并至比色管，然后定容至刻度。準(zhǔn)確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過0.22μmPTFE濾膜，待測。

 

    其他：

 

7.2.3  調(diào)味醬、豆制品、熟肉試樣

 

    稱取試樣2g（準(zhǔn)確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入10mL5%氨水甲醇溶液，超聲5min，在8000r/min下離心5min，重復(fù)提取一遍，合并上清液。準(zhǔn)確移取2mL上清液于氮吹儀上氮吹至干，用2mL甲醇復(fù)溶，轉(zhuǎn)移至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過0.22μmPTFE濾膜，待測。每個(gè)樣品做2個(gè)平行測試，同時(shí)做空白測試。

 

7.3  儀器參考條件

 

7.3.1  液相色譜參考條件

 

    a)  色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.8μm，或同等性能的色譜柱；

 

    b)  流動相：A為5mmol/L乙酸銨水溶液，B為甲醇；梯度洗脫條件見表1；

 

    c)  柱溫：40°C；

 

    d)  進(jìn)樣量：2μL；

 

    e)  流速：0.4mL/min。

 

表1液相色譜梯度洗脫條件

 

時(shí)間，min	流動相A，%	流動相B，%
0.00	98	2
1.00	98	2
15.00	5	95
18.00	5	95
21.00	98	2

 

 

7.3.2  質(zhì)譜參考條件

 

    a)  離子源類型：電噴霧電離源（ESI）；

 

    b)  掃描方式：負(fù)離子電離模式；

 

    c)  檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM；

 

    d)  毛細(xì)管電壓：-2.5kV；

 

    e)  離子源溫度：150°C；

 

    f)  脫溶劑氣溫度：500°C；

 

    g)  脫溶劑氣流速：1000L/h；

 

    h)  錐孔氣流速：150L/h；

 

    i)  定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞電壓參見附錄A。

 

7.4  試樣溶液的測定

 

7.4.1  定性分析

 

    在同樣測試條件下，試樣溶液中禁用水溶性合成色素的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)峰的保留時(shí)間相對偏差在±25%以內(nèi)，且檢測到的相對離子豐度，應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相對離子豐度一致。其允許偏差應(yīng)符合表2的要求。

 

表2定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差

單位為百分號

相對離子豐度	允許偏差
＞50	±20
20～50	±25
10～20	±30
≤10	±50

 

 

7.4.2  定量測定

 

    取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，以特征離子質(zhì)量色譜峰面積定量，按外標(biāo)法計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣溶液中的禁用水溶性合成色素響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見附錄B。

 

7.5  空白試驗(yàn)

 

    除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行測定。

 

 

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